Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification 法による新型インフルエンザウイルス(A/H1N1pdm)迅速検出法の有用性

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豚が起源の新型インフルエンザウイルス(A/H1N1pdm)は2009年4月前半にメキシコで発生した．その後，A/H1N1pdmは世界中で急速に広まった．本研究では，Reverse Transcription(RT)-LAMP法による豚由来のA/H1N1pdmの検出法を検討した．基礎検討において，A/H1N1pdm RNA陽性コントロールを用いてRT-LAMP法を実施し検出を確認した．RT-LAMP増幅産物は典型的なラダーパターンを示した．増幅産物を制限酵素Sau3AIで消化処理し単一のバンドに集約することを確認した．A/Mie/33/2009pdm株(1.56×106〜1.86×106 pfu/mL)をRT-LAMP法およびReal-Time RT-PCR法の感度解析に使用した．RT-LAMP法の感度はReal-Time RT-PCR法と同等であった．RT-LAMP反応は60℃，62.5℃および65℃の異なる温度条件で行い，60℃での反応温度において最も優れた増幅を示した．RT-LAMP法による検出時間は，インフルエンザ迅速診断キットで検出限界以下であった1.56×101〜1.86×101 pfu/mLのA/H1N1pdmを45分以内に検出した．季節性インフルエンザウイルスA型(H1N1，H3N2)，同B型，インフルエンザウイルスC型，アデノウイルス，RSウイルス，ヒューマンメタニューモウイルス，パラインフルエンザウイルス，ボカウイルスとの交差反応は認められず，A/H1N1pdmを特異的に検出できることを確認した．以上の結果から，今回開発したRT-LAMP法は，迅速にA/H1N1pdm遺伝子を検出することが可能であり，適切な治療判断を必要とされる臨床現場において極めて有用な診断法であると考えられた．
2011-09-26

Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification 法による新型インフルエンザウイルス(A/H1N1pdm)迅速検出法の有用性

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