GMP準拠にて製造加工したヒト臨床グレード歯髄幹細胞の品質・安全性の証明

概要

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目的:近年,骨髄・脂肪などの間葉系幹細胞を用い,さまざまな疾病に対する再生医療の臨床研究が行われているが,歯髄幹細胞を用いた再生医療の臨床研究における安全性試験の報告はいまだみられない.幹細胞を臨床研究で用いるためには「ヒト幹細胞を用いる臨床研究に関する指針」に従って臨床グレードの幹細胞を製造加工する必要がある.よってわれわれは,Good Manufacturing Practice (GMP)準拠で標準作業手順書(Standard Operating Procedure, SOP)に基づき歯髄幹細胞を製造加工し,この細胞の品質と安全性を厳密に評価した.材料と方法:ヒト歯をGMP準拠細胞加工施設アイソレータ内に輸送し,歯髄組織から酵素消化法にて歯髄細胞を分離・培養後,granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF)濃度勾配を利用した膜遊走分取法により歯髄幹細胞を分取した.分取後7,15,20代目まで継代し,プログラムフリーザーを用いて凍結した.品質検査として,歯輸送液,初代培養の細胞培養液および継代7代目において,細菌,マイコプラズマ,エンドトキシン,ウイルス検査を行った.また,細胞の表面抗原マーカーの発現率をフローサイトメトリーにて測定した.安全性検査として,NOD/SCIDマウスまたはKSNヌードマウスを用いて,精巣および皮下に15代目歯髄幹細胞を移植して造腫瘍試験を行った.また,ヒト歯髄幹細胞(20代目)を用いて,核型解析をQバンド解析法にて行った.結果:アイソレータ内で分取し,7代目まで増幅し,凍結保存した歯髄幹細胞の生存率は80%以上であり,表面抗原の発現をみると,CD29, 44, 73, 90, 105陽性率は95%以上で,CD31は陰性であり,幹細胞・前駆細胞が多く含まれると考えられた.また,各種感染は認められず,エンドトキシンは1.0(pg/ml)以下であった.さらにマウスに腫瘍形成の所見はみられず,染色体異常・核型異常もみられなかった.結論:GMP準拠にて製造加工したヒト歯髄幹細胞の品質と安全性を明らかにした.今後,この細胞を用いた歯髄再生治療の臨床研究を行い,安全性・有効性を確認することにより,新たな歯髄炎治療法の実用化に進展する可能性が期待できる.
2013-04-30

GMP準拠にて製造加工したヒト臨床グレード歯髄幹細胞の品質・安全性の証明

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