酵母を用いたラットにおける癌抑制遺伝子p53の機能的変異検出法の確立
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概要
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Research is carcinogenesis and cancer treatment, commonly uses rats and their usefulness is well known. Alteration of the p53 tumor suppressor gene is the most common genetic defect known to occur in human tumors and it seems to play an important role in carcinogenesis. Recently, a new biological assay for human p53 using a yeast has been developed. This yeast functional aasay is a simple and more sensitive method than previous methods. This study applied this yeast assay to the analysis of the rat p53 gene and estimated its usefulness. The yeast functional assay for rats could be established by a modification of the assay for humans. Thus, cotransformation of a rat p53 PCR products and pLSRP53 plasmid cut with Pst I and Stu I results in repair of the plasmid with the PCR products in vivo and constitutive expression of the full length rat p53 protein in yeast. After cultivation, yeast inserted with wild-type rat p53 forward white colonies and those inserted with mutant type rat p53 forward red colonies effectively. The ratio (white / red colonies) coresponded well with the mutant ratio of at p53 gene (wild / mutant type). The sequence of p53 cDNA obtained from red colonies detects all clonal mutations. This incidence of mutation fonned out in rat p53 was higher than that of previous reports. These results indicate that the yeast functional assay can be applied to for the analysis of rat p53 and that this assay is highly sensitive and specific enough to estimate the genotype of rat p53.
- 北海道医療大学の論文
- 1999-06-30
著者
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