歯周病におけるγδT細胞の免疫組織化学的研究
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概要
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歯周病におけるγδT細胞(γδT)の役割を明らかにするために, モノクローナル抗体(MoAb)を作製し, 分離した抗体の特異性を明らかにするとともに, それを用いて成人性歯周炎患者の歯肉について免疫組織化学的に検討した.健常なヒト末梢血からFicoll-Paque遠心分離法で分離したリンパ球を, 固相法のanti-CD3と液相法のIL-2の組み合わせ刺激で培養し, 増殖したリンパ球のうちγδTが少なくとも50%以上を含むものを抗原として雌性BALB/cマウスを免疫し, 17日後に細胞融合, その10日後に末梢血リンパ球, 培養γδTの塗抹標本および炎症歯肉組織切片を使用して, 免疫組織化学的にスクリーニングおよびクローニングを行い, 最終的にMoAb 1〜10を得た.分離したMoAb 1〜10は, いずれもリンパ球塗抹標本およびヒト小腸, 歯肉凍結切片において陽性反応を示したが, パラフィン切片においては陰性であった.とくにMoAb 1は, リンパ球および培養γδT塗抹標本において, 1度目の染色を各種市販抗体, 2度目の染色をMoAb 1とした二重染色の結果, 市販のγδT抗体とMoAb 1は95%が交叉し, CD3とMoAb 1は91%, CD45とMoAb 1は93%の交叉性を示した.歯周病患者の歯肉凍結切片におけるMoAb 1陽性細胞の局在性は, 市販γδT抗体によるものと同様の傾向を示した.炎症がほとんどみられない歯肉上皮組織内にも, 少数の陽性細胞を認めたが, その数は, 炎症の程度に比例して, 上皮内および結合組織内ともに増加傾向を示した.上皮内では, 基底細胞付近に多く分布し, また上皮直下の結合組織にも増加傾向を認めた.以上の結果から, 末梢血から分離培養したγδTを使用してMoAbが作製できること, また抗体が認識する細胞は, 歯周炎において炎症の程度に応じて, 上皮内および結合組織内に浸潤することから, 防御反応の第一線を担っていることが示唆された.
- 2001-09-25
著者
-
今井 久夫
大阪歯科大学歯周病学講座
-
今井 久夫
大阪歯科大学
-
魚部 健市
大阪歯科大学口腔病理学講座
-
魚部 健市
大阪歯大・口腔病理
-
実重 英仁
大阪歯科大学歯学部歯周病学講座
-
實重 英仁
大阪歯科大学歯周病学講座
-
魚部 健市
大阪歯大口腔病理
-
實重 英仁
大阪歯大・大学院・歯周病
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