Protein A アフィニティHPLCによる抗体の高速定量系の確立

概要

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モノクローナル抗体医薬品の製造プロセスの構築と妥当性検証のためには，多数のサンプルを迅速に分析することが求められる．本研究では，試料として組換え完全ヒト抗体を発現しているCHO細胞の培養上澄みを用いてProtein AアフィニティHPLCの諸条件を検討し，抗体の自動高速定量法を確立した．パーフュージョンタイプのProtein Aカラムを用い，流速30.1 cm/min（線速度）で，300 mM塩化ナトリウム溶液を含む50 mMリン酸ナトリウムpH 7.0から同溶液pH 2.8へのステップワイズ溶出でクロマトグラフィーを行った．溶出液組成の検討により，抗体溶出ピークのリーディングと，カラムへのタンパク質残存量を低減することができた．本分析法によって，1サンプルあたりの分析時間は2〜2.5分間となり，1時間に24〜30サンプル処理することが可能となった．また，1000回の分析ごとにカラム洗浄を行うことによって，少なくとも3000回の分析が可能であり，分析系の繰り返し精度・耐久性も確認された．
2010-03-05