肝細胞の簡単な分離法の開発とその培養への応用 : 副腎皮質ホルモン投与時の培養肝細胞の代謝
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概要
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Ca-free Hanks solutionに溶解した0.05% collagenase溶液30mlを20ml/minの速度で無菌的に摘出したシロネズミ肝にツベルクリン針を介して直接注入した後,摂子により組織を出来るだけ細く裂開することにより簡単に肝細胞を遊離させることが出来る.混在する赤血球は5〜6回の低速遠沈(200rpm)により除去される.遊離肝細胞は95%以上がtrypan blueをとりこまず,alanine,乳酸からの糖新生,14C-leucineの細胞内蛋白へのとりこみのあることから細胞のviabilityは充分にあると推定される.遊離肝細胞の培養液中に100μg/dishのprednisoloneを加えると糖新生は増加するが蛋白合成は抑制された.3H-prolineを培養液中に加えると3Hhydroxyprolineの生成が証明された.このhydroxyprolineを含む蛋白の本態については現在検討中である.
- 社団法人 日本肝臓学会の論文
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