犬血球表面免疫物質検出法の改良
スポンサーリンク
概要
- 論文の詳細を見る
犬血小板表面の免疫物質IgG，IgMおよび補体(C3)陽性コントロールの作製法を検討した。これらの血小板表面免疫物質は，FITCラベル抗犬IgG抗体，抗犬IgM抗体あるいは抗犬C3抗体を結合させ，フローサイトメトリーを用いて検出した。 IgG，IgMおよびC3それぞれ単独陽性血小板の作製を試みたが，得られたのはIgM陽性血小板のみであった。多血小板血漿にエンドトキシン(Lps)を加えたところ，IgG，IgMおよびC3いずれも陽性の血小板が得られた。このIgG/IgM/C3陽性血小板を，IgG，IgMおよびC3検出のいずれにも共通する陽性トロールとして使用することを考えた。そのためには，上記の3種FITCラベル抗体が，それぞれの標的物質に特異的に結合することが前提となる。 そこで，FITCラベル抗体の8倍量の非ラベル抗犬IgG，抗犬IgMあるいは抗犬C3抗体を10分前から作用させて結合をブロックしたところ，3種類のFITCラベル抗体は標的免疫物質のブロック処理によってのみ結合が阻害され，他の免疫物質との交差反応は否定された。 以上の結果から，これらの抗体を用いることを前提とすれば，IgG/IgM/C3陽性血小板は，3種の免疫物質のいずれにも共通する陽性コントロールとして利用できることが示唆された。Different methods for the preparation of IgG-, IgM- and complement (C3)-positive canine platelets were investigated. Flow cytometry of FITC-conjugated anti-dog IgG, anti-dog IgM and anti-dog C3 polyclonal antibodies was used to detect platelet surface-bound immunological components. Platelets that were positive for IgM only were identified, but platelets positive for only either IgG or C3 were not found. Platelets positive for IgG, IgM and C3 ('IgG/IgM/C3 positive platelets') were prepared by incubating endotoxin (LPS) with platelet rich plasma (PRP) for 30 minutes at room temperature. We considered that IgG/IgM/C3 positive platelets could be used as a common positive control in IgG, IgM and C3 detection assays. To be a common positive control, FITC-conjugated antibodies must bind specifically to their targets on the IgG/IgM/C3 positive platelets. Preincubation of IgG/IgM/C3 positive platelets with eight times excess of non-labeled anti-dog IgG, IgM or C3 antibodies specifically blocked binding by FITC-conjugated anti-dog IgG, IgM or C3 antibodies. These results suggest that IgG/IgM/C3 positive platelets could be utilized as a common positive control in assays for the detection of platelet surface IgG, IgM and C3.
- 麻布大学の論文
- 2009-03-31
麻布大学 | 論文
- 研究科分 鶏の福祉ケージにおける設備配置と空間利用--砂浴び場および巣箱の配置が行動,健康状態および生産反応に及ぼす影響 (平成19年度麻布大学公的研究助成金事業研究成果報告)
- イノシシの行動制御技術開発のための嗅覚・聴覚刺激を用いた研究(I.大学院重点特別・研究科特別経費,平成18年度麻布大学公的研究助成金事業研究成果報告)
- 広域輸送される肥育素牛のストレスおよび動物福祉レベルの評価(I.大学院重点特別・研究科特別経費,平成18年度麻布大学公的研究助成金事業研究成果報告)
- 産卵鶏におけるバタリーケージの再評価 : 福祉ケージとの比較による多面的検討(I.大学院重点特別・研究科特別経費,平成18年度麻布大学公的研究助成金事業研究成果報告)
- 産卵鶏におけるケージ飼育の再評価 : 代替飼育法との比較による多面的検討