研究科分 ネコカリシウイルスの分子疫学的研究 (平成19年度麻布大学公的研究助成金事業研究成果報告)
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概要
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FCV感染症の分子疫学的検討を行うため,カプシド領域におけるFCV検出用プライマーの検討を試みた。新たに作成した3組のプライマーについて,CP-S/CP-Aで検出率が若干低い値を示したが,8F-S/8F-AとAo-S/Ao-Aにおいては既報のプライマーよりも増幅領域が広く,またGI GIIどちらの群に属する株も100%検出できたので,この2種類のプライマーを用い遺伝子群の判定を行えると期待される。FCV comprises only a single serotype, but many mutations are present in the gene sequence, forming quasispecies consisting of various molecular species of sequences. Improvement of the target detection accuracy by RT-PCR is very important for molecular biological approaches. FCV has been reported to be divided into 2 groups, GI and GII, based on the capsid region (bases 6419-7053). We performed RT-PCR using Seal-S/Seal-A primers, as used for grouping in previous reports, and identified the presence of undetectable field strains. To widely detect field isolates using the capsid region, we prepared new primers consisting of sequences outside the reported primer sequences, and investigated the detection accuracy. Eight (including 3 strains isolated from vaccinated cats) of 30 FCV strains (27.0 %) were not detectable using Seal-S/Seal-A primers. The detection rates with the new primers were: 8F-S/8R-A, 100 %; AO-S/AO-A, 100 %; and CP-S/CP-A, 96.7 %. Undetectable strains had marked mutations in the primer binding sites. The mutation rate of the Seal-S binding site was 29.2 %, whereas the rate was 6.9 % in detectable strains. Seven of the 8 undetectable strains belonged to GII, which consists of only Japanese strains, showing a regional influence. Since the undetectable stains included 3 isolates (37.5 %) from vaccinated cats, the presence of such vaccine breakdown strains with marked antigen mutation in vaccinated cats should be considered in clinical diagnosis by PCR. Of the 3 pairs of primers prepared, 8F-S/8R-A and AO-S/AO-A primers amplified wider regions than the reported primers, and detected 100 % of GI and GII strains, suggesting the usefulness of these as detection primers for FCV molecular epidemiology.
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