Expression of Pseudomonas syringae pv. eriobotyae psvA gene, containing Hrp box-like motif, is not regulated by HrpL
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概要
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hrp boxプロモーターはPseudomonas syringaeのhrp遺伝子やavr遺伝子の上流にあり，これらの遺伝子の発現はhrpL遺伝子にコードされているシグマ因子により制御されている．hrp box様モチーフがP.S.pv.eriobotraeのプラスミドから分離された病原性遺伝子psvAの上流に存在することが明らかになった．hrp box様モチーフを有するpsvAの発現がhrpLによって制御されるかどうかを調べるために，hrpLにカナマイシン耐性遺伝子を挿入した自殺ベクターpUC19LKを用いてマーカーエクスチェンジによるhrpL変異株を構築し，サザンハイブリダイゼーションおよびPCRで確認した．これらhrpL変異株は病原性を失い，hrp boxを有するhrpZの発現もRT-PCRで認められず，hrpLに変異が起きていることが裏付けられた．得られたhrpL変異株におけるpsvAの発現をウエスタンブロッティングおよびRT-PCRで調べた結果，野生株と同じように発現しており，我々の実験結果はpsvAの発現はhrpL制御されていないことを示唆していた．A conserved promoter sequence, the hrp box is located upstream of many hrp (hypersensitive reaction and pathogenicity) and avr (avirulence) genes in Pseudomonas syringae. Expression of these genes is positively regulated by hrpL, which encodes an alternate sigma factor. An hrp box-like motif was found upstream of the virulence gene psvA isolated from a plasmid of P. s. pv. eriobotryae. To investigate whether the expression of psvA is regulated by hrpL, hrpL mutants were constructed by marker exchange mutagenesis using a suicide vector pUC19LK, which contained hrpL interrupted by insertion of the kanamycin resistance gene (Kmr). Markerexchanged hrpL mutants were confirmed by Southern hybridization and PCR analyses. The hrpL mutants had lost their virulence, and the expression of hrpZ containing the hrp box was not detected by RT-PCR, confirming that the hrpL gene was mutated. Western blot and RT-PCR analyses showed that psvA was exprssed in hrpL mutants as well as the wild-type strain. Our data sugges that expression of psvA is not regulated by HrpL.
- 2010-02-28
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