ホルマリン固定におけるDNA変性機序の基礎的検討とホルマリン固定材料の遺伝子診断への応用
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概要
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ホルマリン固定中に生じるDNA低分子化機序につき解析を行い,次いで,ホJレマリン固定検体からの遺伝子診断について検討を行なった。ホルマリンのDNAに対する直接作用,pHの影響を事討するため,精製されたDNAIに種々の条件のホルマリンを加え変化を観察した。ホルマリンのpH低下に伴いDNAの変性を認めたが,緩衝ホルマリン中ではDNAは変性を示さなかった。DNAの変性防止には,蛋白処理法やDNA抽出法の変更はあまり有効ではなく,低温固定やEDTAの使用が有効であった。すなわち組織固定の際に見られるDNA低分子化には,核酸分解酵素等の役割が大きいと考えられた。従って,固定法を改善すれば,ホルマリン固定検体でもDNAの保存が可能になると考えられた。ホルマリン固定検体から抽出されたDNAより,サザンプロット法及びPCR法によりHTLV-I プロウィルス遺伝子の検出が可飽であった。ホルマリン固定検体から抽出されたDNAの多くは変性しているが,その一部は遺伝子解析に利用が可能であり今後の発展が期待される。
- 神戸大学の論文