二次元電気泳動法によるエンバク葉の可溶性蛋白質の分離
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概要
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Separation of soluble proteins of oat leaves was examined by two-dimensional acrylamide gel electrophoresis of O'Farrell with a slight modification. The supernatant of oat leaf homogenate obtained by the centrifugation at 10,000 × g for 15 min was used as a soluble protein fraction. The first dimensional electrophoresis was conducted by isoelectric focusing method by adding 9.2M urea and 2% Nonidet P-40 to protein samples and gels. The best separation of proteins for the two-dimensional electrophoresis was achieved by the electrophoresis of 500µg proteins with a pH 4.2-8.8 gradient at 25V/gel for 18 hours. The gel was then extruded into 50ml of 62.5mM Tris-HCl buffer (pH 6.8) containing 2.3% sodium dodecylsulphate (SDS), 10% glycerine and 5% β-mercaptoethanol and shaken at 25℃ for 6 hours. The second dimensional electrophoresis was carried out on discontinuous SDS-acrylamide gel plates, giving current of 20mA for 6.5 hours. This procedure provided the resolution of 143 spots of proteins on the gel plate with high reliability.O'FARRELLの二次元電気泳動法により, エンバク (Avena sativa L.) 子苗葉の可溶性蛋白質の分離を試みた. (1) 可溶性蛋白質には磨砕液を10,000 × g, 15分遠心分画した上澄液を用いた. 等電点分画法による一次元電気泳動は試料およびゲルに9.2M尿素および2%ノニデットP-40を加え, 蛋白質量を500µg添加して, 25V, 18時間通電すると, 明瞭なバンドが検出された. 泳動後のゲル中のpH勾配は4.2-8.8であった. (2) 上記のゲルを2.3%SDS, 10%グリセリン, 5%β-メルカプトエタノール含有の62.5mMトリス-塩酸緩衝液(pH6.8)50mlに25℃, 6時間浸漬した後, 不連続SDS-アクリルアミドゲル法により二次元電気泳動を20mA, 6時間30分行うと, 高い再現性で143コのスポットが検出された.
- 1977-09-30
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